来源：正道高级完全中学 发布时间：2014-05-28 11:10:00 浏览：6914
实验八叶绿体色素的提取和分离（必修一P97）
一．实验目的：
1．尝试用过滤方法提取叶绿体中的色素和用纸层析法分离提取到的色素。
2．分析实验结果，探究叶绿体中有几种色素，以及各自所呈现的颜色。
二．实验原理：
1．叶绿体中的色素是有机物，不溶于水，易溶于丙酮等有机溶剂中，所以用丙酮、乙醇等能提取色素。
2．层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂。叶绿体色素在层析液中的溶解度不同，分子量小的溶解度高，随层析液在滤纸上扩散得快，溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。所以用层析法来分离四种色素。
三、实验材料：幼嫩、鲜绿的菠菜叶
四、实验步骤：
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步 骤 |
注 意 问 题 |
分 析 |
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1．提取色素 5克绿叶剪碎，放入研钵，加SiO2、CaCO3和5mL丙酮（或10mL无水乙醇）迅速、充分研磨。（若没有无水乙醇，也可用体积分数为95%的乙醇，但要加入适量的无水碳酸钠，除去水分） |
加SiO2 加CaCO3
加丙酮 迅速 |
加SiO2为了研磨得更充分。 加CaCO3防止研磨时叶绿素受到破坏。因为叶绿素含镁，可被细胞液中的有机酸产生的氢代替，形成去镁叶绿素，CaCO3可中和液泡破坏释放的有机酸，防止叶绿体被破坏。 叶绿体色素易溶于丙酮等有机溶剂。 减少研磨过程叶绿素的分解，减少有毒性的丙酮挥发。 |
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2．收集滤液 漏斗基部放一单层尼龙布，研磨倒入漏斗内挤压，将滤液收集到小试管中，用棉花塞塞住试管口。 |
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尼龙布起过滤作用。
试管口用棉花塞塞紧是为了防止丙酮挥发。 |
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3．制备滤纸条 将干燥的滤纸，顺着纸纹剪成长10cm，宽1cm的纸条，一端剪去二个角，并在距这一端1cm处划一铅笔线。 |
干燥 顺着纸纹剪成长条 一端剪去二个角 |
可吸收更多的滤液。 层析时，色素分离效果好。 可使层析液同时到达滤液细线。 |
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4．划滤液细线 用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线划出细、齐、直的一条滤液细线，干后重复三次。 |
滤液细线越细、越齐越好。 重复三次。 |
防止色素带之间部分重叠。
增加色素在滤纸上的附着量，实验结果更明显。 |
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5．纸层析法分离色素 将3mL层析液倒入烧杯中，将滤纸条（划线一端朝下）插入层析液中，用培养皿盖盖上烧杯。 |
层析液不能没及滤纸条。 烧杯要盖培养皿盖。 |
防止色素溶解在层析液中，
层析液中的苯、丙酮、石油醚易挥发。 |
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6．观察实验结果
由上至下分别为： 胡萝卜素（橙黄色） 叶黄素（黄色） 叶绿素a（蓝绿色） 叶绿素b（黄绿色）
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扩散最快是胡萝卜素，扩散最慢是叶绿素b，含量最多的是叶绿素a。
四种色素之所以能被分离，是因为四种色素随层析液在滤纸上的扩散速度不同。
1．滤纸条上的滤液细线，为什么不能触及层析液？
答：滤纸条上的滤液细线如触及层析液，滤纸上的叶绿体色素就会溶解在层析液中，实验就会失败。
2．提取和分离叶绿体色素的关键是什么？
答：提取叶绿体色素的关键是：①叶片要新鲜、浓绿；②研磨要迅速、充分；③滤液收集后，要及时用棉塞将试管口塞紧，以免滤液挥发。分离叶绿体色素的关键是：一是滤液细线要细且直，而且要重复划几次；二是层析液不能没及滤液线。
实验九 探究酵母菌的呼吸方式（必修一P91）
一．实验目的：
1．了解酵母菌的无氧呼吸和有氧呼吸情况
2．学会运用对比实验的方法设计实验
二．实验原理：
1．酵母菌是一种单细胞真菌，在有氧和无氧的条件下都能生存，属于兼性厌氧菌，因此便于用来研究细胞呼吸的不同方式。方程式（略）
2． CO2可使澄清石灰水变混浊，也可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄。根据石灰水混浊程度或溴麝香草酚蓝水溶液变成黄色的时间长短，可以检测酵母菌培养CO2的产生情况。
3．橙色的重铬酸钾溶液，在酸性条件下与乙醇（酒精）发生化学反应，在酸性条件下，变成灰绿色。
三．方法步骤：
提出问题→作出假设→设计实验→（包括选择实验材料、选择实验器具、确定实验步骤、设计实验记录表格）→实施实验→分析与结论→表达与交流。
1．酵母菌培养液的配制
取20g新鲜的食用酵母菌，分成两等份，分别放入锥形瓶A（500mL）和锥形瓶B（500mL）中 ，再分别向瓶中注入240mL质量分数为5%的葡萄糖溶液
2．检测CO2的产生
用锥形瓶和其他材料用具组装好实验装置（如图），并连通橡皮球（或气泵），让空气间断而持续地依次通过3个锥形瓶（约50min）。然后将实验装置放到25-350C的环境中培养8-10h。
3．检测洒精的产生
各取2mL酵母菌培养液的滤液，分别注入2支干净的试管中。向试管中分别滴加0.5mL溶有0.1g重铬酸钾的浓硫酸溶液（体积分数为95%-97%）并轻轻振荡，使它们混合均匀，观察试管中溶液的颜色变化。
实验十 观察细胞的有丝分裂（必修一P115）
一．实验目的：
1．制作洋葱根尖细胞有丝分裂装片
2．观察植物细胞有丝分裂的过程，识别有丝分裂的不同时期，比较细胞周期不同时期的时间长短。
3．绘制植物细胞有丝分裂简图。
二．实验原理：
1．在高等植物体内，有丝分裂常见于根尖、芽尖等分生区细胞。由于各个细胞的分裂是独立进行的，因此在同一分生组织中可以看到处于不同分裂时期的细胞。
2．染色体容易被碱性染料（如龙胆紫溶液）着色，通过在高倍显微镜下观察各个时期细胞内染色体（或染色质）的存在状态，就可判断这些细胞处于有丝分裂的哪个时期，进而认识有丝分裂的完整过程。
三．实验材料： 洋葱（可用葱、蒜代替）。因为根尖生长点属于分生组织，细胞分裂能力强，易观察到有丝分裂各个时期的细胞。
四．实验步骤：
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步 骤 |
注 意 问 题 |
分 析 |
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一、根尖的培养 实验前3~4天，让洋葱放在广口瓶上，底部接触清水。根长约5cm时可用。 |
置于温暖处，常换水。 |
因为细胞分裂和生长需要水分、适宜的温度和氧气。 |
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二、装片的制作 （解离→漂洗→染色→制片） 1．解离：上午10时至下午2时，剪取洋葱根尖2~3mm，立即放入盛有质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液的混合液（1：1）的玻璃皿中，室温下解离3~5min。 |
解离时间要保证，细胞才能分散开来。
解离时间也不宜过长。 |
目的：溶解细胞间质，使组织中的细胞相互分离开来。此时，细胞已被盐酸杀死。 否则，根尖过于酥软，无法取出。 |
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2．漂洗：待根尖酥软后，用镊子取出，放入盛有清水的玻璃皿中漂洗约10 min。 |
漂洗要充分，可换水1~2次。
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目的：洗去解离液，便于染色。
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3．染色：把洋葱根尖放进盛有质量浓度为0.01g/mL或0.02g/mL的龙胆紫溶液的玻璃皿中染色3~5min。 |
染色时间不宜过长，否则显微镜下一片紫色，无法观察。 |
龙胆紫等为碱性染料，可使染色体着色。 醋酸洋红溶液也能使染色体着色 |
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4．制片：用镊子将这段洋葱根尖取出来，放在载玻片上，加一滴清水，并用镊子尖把洋葱根尖弄碎，盖上盖玻片，在盖玻片上再加一片载玻片。然后，用拇指轻轻地压载玻片，使细胞分散开来。 |
要弄碎根尖，再垂直向下均匀用力压片，不可移动盖玻片， |
目的：使细胞分散，避免细胞重叠，便于观察。做得成功的装片，标本被压成云雾状。 |
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三、观察 1．低倍镜观察：把装片放在低倍镜 下，慢慢移动装片，找到分生区细胞。
2．高倍镜观察：移走低倍镜，换上高倍镜，用细准焦螺旋和反光镜把视野调整清晰，仔细观察，找出处于细胞分裂期中期的细胞，再找出前期、后期、末期的细胞。 |
一定要找到分生区。
在一个视野里，往往不容易找全有丝分裂过程中各个时期的细胞。如果是这样，可以慢慢地移动装片，从邻近的分生区细胞中寻找。 |
分生区细胞特点是：细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞正处于分裂期。 |
讨论：制作好洋葱根尖有丝分裂装片的关键是什么？
答：制作好洋葱根尖有丝分裂装片的关键有以下几点：（1）剪取洋葱根尖材料时，应该在洋葱根尖细胞一天之中分裂最活跃的时间；（2）解离时，要将根尖细胞杀死，细胞间质被溶解，使细胞容易分离；（3）压片时，用力的大小要适当，要使根尖被压平，细胞分散开。
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