来源：正道高级完全中学 发布时间：2014-05-28 11:12:12 浏览：8628
一、光学显微镜的结构、呈像原理、放大倍数计算方法
结构：
光学部分：目镜、镜筒、物镜、遮光器（有大小光圈）和反光镜（有平面镜和凹面镜）
机械部分：镜座、倾斜关节、镜臂、载物台（上有通光孔、压片夹）、镜头转换器、粗、细准焦螺旋。
注：目镜无旋转螺丝，镜头越长，放大倍数越小；物镜有旋转螺丝，镜头越长，放大倍数越大。
呈像原理：映入眼球内的是倒立放大的虚像。（物镜质量的优劣直接影响成像的清晰程度）
放大倍数：目镜和物镜二者放大倍数的乘积）
注：显微镜放大倍数是指直径倍数，即长度和宽度，而不是面积。
二、显微镜的使用：置镜（装镜头）→对光→置片→调焦→观察
1．安放。显微镜放置在桌前略偏左，距桌缘8—10cm处，装好物镜和目镜（目镜5× 物镜10×）
2．对光。转动转换器，使低倍镜对准通光孔，选取较大光圈对准通光孔。左眼注视目镜，同时把反光镜转向光源，直至视野光亮均匀适度。调节视野亮度只可用遮光器和反光镜，光线过强，改用较小光圈或用平面反光镜；光线过弱，改用较大光圈或用凹面反光镜。选低倍镜→选较大的光圈→选反光镜（左眼观察）
3．观察。将切片或装片放在载物台上，标本正对通光孔中心。转动粗准焦螺旋（顺时针），俯首侧视镜筒慢慢下降，直到物镜接近切片（约0.5cm），左眼观察目镜，（反时针）旋转粗准焦螺旋，使镜筒慢慢上升，看到物像时轻微来回旋转细准焦，直到物像清晰。（找不到物像时，可重复一次或移动装片使标本移至通光孔中心）。．观察时两眼都要睁开，便于左眼观察，右眼看着画图。侧面观察降镜筒→左眼观察找物像→细准焦螺旋调清晰
4．高倍镜的转换。找到物像后，把要观察的物像移到视野中央，把低倍镜移走，换上高倍镜，只准用细准焦螺旋和反光镜把视野调整清晰，直到物像清楚为止。
顺序：移装片→转动镜头转换器→调反光镜或光圈→调细准焦螺旋
注：换高倍物镜时只能移动转换器，换镜后，只准调节细准焦和反光镜（或光圈）。
问1：低倍镜换为高倍镜后，若看不到或看不清原来的像，可能原因？（ABC）
A、物像不在视野中 B、焦距不在同一平面 C、载玻片放反，盖玻片在下面 D、未换目镜
问2：放大倍数与视野的关系：
放大倍数越小，视野范围越大，看到的细胞数目越多，视野越亮，工作距离越长；
放大倍数越大，视野范围越小，看到的细胞数目越少，视野越暗，工作距离越短。
故装片不能反放。
5．装片的制作和移动：制作：滴清水→放材料→盖片
移动：物像在何方，就将载玻片向何处移。（原因：物像移动的方向和实际移动玻片的方向相反）
6．污点判断：1）污点随载玻片的移动而移动，则位于载玻片上；
2）污点不随载玻片移动，换目镜后消失，则位于目镜；换物镜后消失，则位于物镜；
3）污点不随载玻片移动，换镜后也不消失，则位于反光镜上。
7．完毕工作。使用完毕后，取下装片，转动镜头转换器，逆时针旋出物镜，旋进镜头盒；取出目镜，插进镜头盒，盖上。把显微镜放正。
实验一：观察DNA、RNA在细胞中的分布（必修一P26）
一．实验目的：初步掌握观察DNA和RNA在细胞中分布的方法
二．实验原理：
1．甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示DNA和RNA在细胞中的分布。
2．盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色休中的DNA和蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。
三．方法步骤：
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操作步骤 |
注意问题 |
解释 |
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取口腔上皮细胞制片 |
载玻片要洁净，滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液 用消毒牙签在自己漱净的口腔内侧壁上轻刮几下取细胞 将载玻片在酒精灯下烘干 |
防止污迹干扰观察效果 保持细胞原有形态 消毒为防止感染，漱口避免取材失败 固定装片 |
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水解 |
将烘干的载玻片放入质量分数为8%的盐酸溶液中，用300C水浴保温5min |
改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，促进染色体的DNA与蛋白质分离而被染色 |
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冲冼涂片 |
用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片10S |
洗去残留在外的盐酸 |
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染色 |
滴2滴吡罗红甲绿染色剂于载玻片上染色5min |
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观察 |
先低倍镜观察，选择染色均匀、色泽浅的区域，移至视野中央，调节清晰后才换用高倍物镜观察 |
使观察效果最佳 |
实验二 检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质（必修一P18）
一．实验目的： 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质
二．实验原理：某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。
1．可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，可生成砖红色的Cu 2O沉淀。如：
加热
葡萄糖+ Cu ( OH ) 2 
葡萄糖酸 + Cu 2O↓（砖红色）+ H 2O，即Cu ( OH ) 2被还原成Cu 2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。
2．脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染液染成红色）。淀粉遇碘变蓝色。
3．蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。（蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用，产生紫色反应。）
三．实验材料
1．做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨。（因为组织的颜色较浅，易于观察。）
2．做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡3~4小时（也可用蓖麻种子）。
3．做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。
四、实验试剂
斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和乙液：质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液）、苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和B液：质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液）、体积分数为50%的酒精溶液，碘液、蒸馏水。
五、方法步骤：
（一）可溶性糖的鉴定
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操 作 方 法 |
注 意 问 题 |
解 释 |
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1. 制备组织样液。 （去皮、切块、研磨、过滤） |
苹果或梨组织液必须临时制备。 </t |
